Что такое хорошо и что такое плохо
Как вы все уже наверное читали, в крымском парламенте предлагают законодательно запретить публичное исполнение произведений иноагентов и авторов из недружественных стран.
Предложение, конечно же, полностью поддерживаю - доколе Каталина будет испытывать наше терпение? Но необходимо все же разобраться, что допустимо, а что - нет. И, само собой, предлагаемые запреты следует распространить и на область науки, чтобы защитить ее от тлетворного влияния.
Я подготовил небольшой гайд по правильному выбору для ученых.
Энжойте и действуйте верно!
Как вы все уже наверное читали, в крымском парламенте предлагают законодательно запретить публичное исполнение произведений иноагентов и авторов из недружественных стран.
Предложение, конечно же, полностью поддерживаю - доколе Каталина будет испытывать наше терпение? Но необходимо все же разобраться, что допустимо, а что - нет. И, само собой, предлагаемые запреты следует распространить и на область науки, чтобы защитить ее от тлетворного влияния.
Я подготовил небольшой гайд по правильному выбору для ученых.
Энжойте и действуйте верно!
😁51❤18🔥9😢4👍2
Недорогой способ синтеза NHS-активированных эфиров биотина в лаборатории
Эфиры N-гидроксисукцинимида (NHS) относятся к группе амино-реактивных соединений. С ними очень удобно метить белки. Как правило, NHS-эфиры реагируют с первичной аминогруппой в боковой цепи поверхностного лизина, образуя стабильную пептидную связь. NHS-эфиры широко используются в методах биоконъюгации - включая производные флуоресцентных красителей, ферментов, а также биотина (часто называемые биотин-NHS).
Коммерческие NHS-эфиры довольно дорогие, поэтому для наших (и не только наших) реалий всегда полезно иметь под рукой способ, как сделать всё это доступно.
Команда iGEM LMU‑TUM (Мюнхен, 2016) в рамках проекта по биопринтингу описала простую и дешевую методику синтеза биотиновых NHS-производных, пригодных для биотинилирования пептидов, олигонуклеотидов или белков. В основе лежит активация карбоксильной группы биотина с помощью DCC, с последующим присоединением N-гидроксисукцинимида. В результате получают NHS-биотин. По похожей схеме синтезируют и активированные эфиры биотина с аминокислотными линкерами - например, с валином или аминокапроновой кислотой. Добавление аминокислот уменьшает стерические затруднения и защищает от действия биотинидазы.
Процедура описана очень подробно. Ничего экзотического для синтеза не требуется: оборудование - обычное для химической лаборатории (роторный испаритель, масляная баня). Готовый продукт получают с выходом около 90% по несложному протоколу. А самое приятное - себестоимость составляет всего 4–5% от стоимости аналогичных коммерческих реагентов.
Такой подход делает биотинилирование доступным, масштабируемым и не требующим дорогих реактивов, что особенно ценно для лабораторий с ограниченным бюджетом.
По ссылке есть еще разделы по использованию биотинилирования белков для биопечати и много другого интересного.
Энжойте и варите свои NHS-эфиры биотина!
Эфиры N-гидроксисукцинимида (NHS) относятся к группе амино-реактивных соединений. С ними очень удобно метить белки. Как правило, NHS-эфиры реагируют с первичной аминогруппой в боковой цепи поверхностного лизина, образуя стабильную пептидную связь. NHS-эфиры широко используются в методах биоконъюгации - включая производные флуоресцентных красителей, ферментов, а также биотина (часто называемые биотин-NHS).
Коммерческие NHS-эфиры довольно дорогие, поэтому для наших (и не только наших) реалий всегда полезно иметь под рукой способ, как сделать всё это доступно.
Команда iGEM LMU‑TUM (Мюнхен, 2016) в рамках проекта по биопринтингу описала простую и дешевую методику синтеза биотиновых NHS-производных, пригодных для биотинилирования пептидов, олигонуклеотидов или белков. В основе лежит активация карбоксильной группы биотина с помощью DCC, с последующим присоединением N-гидроксисукцинимида. В результате получают NHS-биотин. По похожей схеме синтезируют и активированные эфиры биотина с аминокислотными линкерами - например, с валином или аминокапроновой кислотой. Добавление аминокислот уменьшает стерические затруднения и защищает от действия биотинидазы.
Процедура описана очень подробно. Ничего экзотического для синтеза не требуется: оборудование - обычное для химической лаборатории (роторный испаритель, масляная баня). Готовый продукт получают с выходом около 90% по несложному протоколу. А самое приятное - себестоимость составляет всего 4–5% от стоимости аналогичных коммерческих реагентов.
Такой подход делает биотинилирование доступным, масштабируемым и не требующим дорогих реактивов, что особенно ценно для лабораторий с ограниченным бюджетом.
По ссылке есть еще разделы по использованию биотинилирования белков для биопечати и много другого интересного.
Энжойте и варите свои NHS-эфиры биотина!
❤25🔥7👍4
Когда важна ориентация или как направленно иммобилизировать IgG на сорбент
Ориентированная иммобилизация IgG - это подход, при котором антитела фиксируются на поверхности сорбента таким образом, чтобы их антигенсвязывающие участки (Fab-фрагменты) оставались свободными и направленными наружу. Это особенно важно при создании эффективных иммуносорбентов, иммуноанализов и биосенсоров.
Если иммобилизовать IgG случайным образом (например, через аминогруппы лизинов), антигенсвязывающие участки могут оказаться недоступными или ориентированы внутрь - это снижает эффективность связывания, чувствительность и специфичность. Показано, что при случайной иммобилизации только 10% антител остаются рабочими. В некоторых случаях этого достаточно, но всегда же хочется лучшего!
Есть несколько подходов направленной иммобилизации:
1. Через Fc-область с помощью белков A, G и L
Сначала белок A или G ковалентно фиксируют на сорбенте. Затем добавляют IgG - он ориентированно связывается через Fc-область. Для надежности можно дополнительно зафиксировать комплекс ковалентно. Такой подход, частности, используется при получении иммуносорбентов для иммунопреципитации. Недостатки: IgG разных видов связываются с белком А неодинаково, кроме того, на белок А могут сесть и IgG из сыворотки.
2. Восстановить с помощью TCEP, DTT или 2- меркаптоэтиламином дисульфидные связи между тяжелыми цепями, IgG распадается на две моновалентные половинки. А потом остается и иммобилизовать по тиолам с помощью малеимидов (или на эпокси-активированном сорбенте). Недостаток: при разрыве SS связей может нарушиться трехмерная структура IgG и если передержать могут отвалиться и легкие цепи.
3. Генетическая инженерия IgG с введением в Fc фрагмент фрагментов для ориентированной иммобилизации. В качестве таких фрагментов могут быть использваны аффинные пептиды, дополнительные цистеины и т.д. Недостаток: работает только с рекомбинантными иммуноглобулинами.
3. Молекула IgG гликозилирована неравномерно - в Fc участке остатков сахаров больше, чем в антигенсвязывающем вариабельном участке. И поэтому, если окислить сахара перийодатом до альдегидов, можно иммобилизировать предпочтительно по Fc фрагменту на сорбенте с гидразидными или аминогруппами. Недостаток: многие моноклональные антитела не гликозилированы и поэтому такой способ не прокатит. Кроме того, возможна кросс-сшивка IgG между собой.
4. Биотинилирование по консервативному глутамину 295. В Fc фрагменте тяжелых цепей IgG различных видов есть консервативный остаток Q295. Для оринтированной иммобилизации используют микробную трансглутаминазу (тот самый демонизированный "мясной клей"). Этот фермент катализирует образование амидной связи между гамма-карбоксамидной группой боковой цепи глутамина и аминогруппой. Таким образом, можно пометить этот глутамин аминосодержащим производным биотином и посадить на сорбент со стрептавидином. А можно еще специально вводить схожие последовательности в разные места Fc фрагмента. Такой подход широко используетсмя для конъюгации антител с лекарствами.
Ориентированная иммобилизация IgG - это подход, при котором антитела фиксируются на поверхности сорбента таким образом, чтобы их антигенсвязывающие участки (Fab-фрагменты) оставались свободными и направленными наружу. Это особенно важно при создании эффективных иммуносорбентов, иммуноанализов и биосенсоров.
Если иммобилизовать IgG случайным образом (например, через аминогруппы лизинов), антигенсвязывающие участки могут оказаться недоступными или ориентированы внутрь - это снижает эффективность связывания, чувствительность и специфичность. Показано, что при случайной иммобилизации только 10% антител остаются рабочими. В некоторых случаях этого достаточно, но всегда же хочется лучшего!
Есть несколько подходов направленной иммобилизации:
1. Через Fc-область с помощью белков A, G и L
Сначала белок A или G ковалентно фиксируют на сорбенте. Затем добавляют IgG - он ориентированно связывается через Fc-область. Для надежности можно дополнительно зафиксировать комплекс ковалентно. Такой подход, частности, используется при получении иммуносорбентов для иммунопреципитации. Недостатки: IgG разных видов связываются с белком А неодинаково, кроме того, на белок А могут сесть и IgG из сыворотки.
2. Восстановить с помощью TCEP, DTT или 2- меркаптоэтиламином дисульфидные связи между тяжелыми цепями, IgG распадается на две моновалентные половинки. А потом остается и иммобилизовать по тиолам с помощью малеимидов (или на эпокси-активированном сорбенте). Недостаток: при разрыве SS связей может нарушиться трехмерная структура IgG и если передержать могут отвалиться и легкие цепи.
3. Генетическая инженерия IgG с введением в Fc фрагмент фрагментов для ориентированной иммобилизации. В качестве таких фрагментов могут быть использваны аффинные пептиды, дополнительные цистеины и т.д. Недостаток: работает только с рекомбинантными иммуноглобулинами.
3. Молекула IgG гликозилирована неравномерно - в Fc участке остатков сахаров больше, чем в антигенсвязывающем вариабельном участке. И поэтому, если окислить сахара перийодатом до альдегидов, можно иммобилизировать предпочтительно по Fc фрагменту на сорбенте с гидразидными или аминогруппами. Недостаток: многие моноклональные антитела не гликозилированы и поэтому такой способ не прокатит. Кроме того, возможна кросс-сшивка IgG между собой.
4. Биотинилирование по консервативному глутамину 295. В Fc фрагменте тяжелых цепей IgG различных видов есть консервативный остаток Q295. Для оринтированной иммобилизации используют микробную трансглутаминазу (тот самый демонизированный "мясной клей"). Этот фермент катализирует образование амидной связи между гамма-карбоксамидной группой боковой цепи глутамина и аминогруппой. Таким образом, можно пометить этот глутамин аминосодержащим производным биотином и посадить на сорбент со стрептавидином. А можно еще специально вводить схожие последовательности в разные места Fc фрагмента. Такой подход широко используетсмя для конъюгации антител с лекарствами.
❤18🔥14👍5
Вы никогда не приготовите хороший буфер если разозлите его
Для того, чтобы получить правильно буфер недостаточно точно взвесить компоненты, аккуратно довести pH и долить до нужного объема. Что же еще нужно?
Буферной - это дух буферов, обитающий в лаборатории, дальний родственник водяного.
Он может быть враждебным для сотрудников со слабыми знаниями и непомерным ЧСВ. Не терпит, когда Трис относят к буферам Гуда и не учитывают изменение pH при охлаждении и нагреве.
Буферной обитает на донышке бутылки со старым буфером. Если кто-то выливает перебирается в свежий буфер. Поэтому важно в лабе иметь банку со выдержанным раствором.
Буферной обожает экспы с большим расходом буферов. Именно поэтому мокрый перенос при вестерне так эффективен.
Буферной не любит холод, и именно поэтому в холодильниках буферы реже портятся.
Летом в нем просыпается нечеловеческая жажда, поэтому буферы нужно готовить с запасом, чтобы хватило и для буферного и для экспа.
Предупрежден - значит вооружен! Энжойте и не забывайте про духа лаборатории!
Для того, чтобы получить правильно буфер недостаточно точно взвесить компоненты, аккуратно довести pH и долить до нужного объема. Что же еще нужно?
Буферной - это дух буферов, обитающий в лаборатории, дальний родственник водяного.
Он может быть враждебным для сотрудников со слабыми знаниями и непомерным ЧСВ. Не терпит, когда Трис относят к буферам Гуда и не учитывают изменение pH при охлаждении и нагреве.
Буферной обитает на донышке бутылки со старым буфером. Если кто-то выливает перебирается в свежий буфер. Поэтому важно в лабе иметь банку со выдержанным раствором.
Буферной обожает экспы с большим расходом буферов. Именно поэтому мокрый перенос при вестерне так эффективен.
Буферной не любит холод, и именно поэтому в холодильниках буферы реже портятся.
Летом в нем просыпается нечеловеческая жажда, поэтому буферы нужно готовить с запасом, чтобы хватило и для буферного и для экспа.
Предупрежден - значит вооружен! Энжойте и не забывайте про духа лаборатории!
❤86😁36👍11🤔5👎1😱1
Цианотипируй микроба или как обнаружить бактерии без посевов и ПЦР
Испанские и шведские ученые разработали ультрачувствительный метод диагностики бактерий, который не требует дорогостоящего оборудования и дает результат за 3 часа.
Принцип метода - в модифицированной цианотипной фотохимической реакции, где вместо УФ используется видимый свет, чтобы ускорить и упростить обнаружение жизнеспособных бактерий. Цианотипия - олдскульный фотографический процесс, который использует соли железа для создания изображений в оттенках синего (и не только синего!). Апологет цианотипии в наших краях, как известно, Александр @alex_fc, его интересный канал с разными фотохимическими протоколами.
Для выявления бактерий к пробе добавляют железосодержащие соединения (цитрат железа(III)-аммония + гексацианоферрат калия), бактерии на свету их метаболизируют. В результате образуется осадок берлинской лазури (смесь гексацианоферратов) - синий пигмент, видимый невооруженным глазом. А для количественного анализа можно измерить оптическую плотность при 720 нм. Тут интересно, что измеряют оптическую плотность не раствора, в взвеси пигмента (написал автору, специально уточнил).
Как заявляют ученые, метод позволяет обнаружить даже одну живую бактерию! Так интересно получается, химия фотопроцесса для нужд микробиологии. Все связано со всем!
Еще один пример необычного использования фотоматериалов для решения биохимических задач с определением активности ферментов - тут.
Испанские и шведские ученые разработали ультрачувствительный метод диагностики бактерий, который не требует дорогостоящего оборудования и дает результат за 3 часа.
Принцип метода - в модифицированной цианотипной фотохимической реакции, где вместо УФ используется видимый свет, чтобы ускорить и упростить обнаружение жизнеспособных бактерий. Цианотипия - олдскульный фотографический процесс, который использует соли железа для создания изображений в оттенках синего (и не только синего!). Апологет цианотипии в наших краях, как известно, Александр @alex_fc, его интересный канал с разными фотохимическими протоколами.
Для выявления бактерий к пробе добавляют железосодержащие соединения (цитрат железа(III)-аммония + гексацианоферрат калия), бактерии на свету их метаболизируют. В результате образуется осадок берлинской лазури (смесь гексацианоферратов) - синий пигмент, видимый невооруженным глазом. А для количественного анализа можно измерить оптическую плотность при 720 нм. Тут интересно, что измеряют оптическую плотность не раствора, в взвеси пигмента (написал автору, специально уточнил).
Как заявляют ученые, метод позволяет обнаружить даже одну живую бактерию! Так интересно получается, химия фотопроцесса для нужд микробиологии. Все связано со всем!
Еще один пример необычного использования фотоматериалов для решения биохимических задач с определением активности ферментов - тут.
❤41🔥8👍4
This media is not supported in your browser
VIEW IN TELEGRAM
Держи журналиста в черном теле
Наверное, многие научные сотрудники сталкивались с журналистами, которые приходят в наши лаборатории и выпытывают сенсации.
В 2020 году, в ковидные времена, мы разрабатывали тест-полоски на антитела к SARS-CoV-2. Тема была новая, конечно, все шло не так быстро. Но руководство университета нагнало журналистов, и отказаться было нельзя. Чтобы избежать ошибок, пришлось все показать и рассказать понятным языком. Но я оказался слишком оптимистичен в оценке уровня понимания журналистов. Когда вышел сюжет, оказалось, что все, что я объяснил, поняли совершенно не так.
«Ученые отрезали белок шипа и поместили в клетки человека» - ну как так-то, ведь несложно! Экспрессировали RBD-домен, иммобилизировали на золотых наночастицах. Как тут можно извратить фразу!
В общем, глаз да глаз нужен за ними! Наверное, проще текст им самим написать, хотя не уверен, что это поможет. Мой личный лайфхак: когда я работал в большой науке, при приходе журналистов я надевал черный халат и на любые вопросы отвечал, что я обычный техник. И это срабатывало - они сразу теряли интерес и шли искать новую жертву
Наверное, многие научные сотрудники сталкивались с журналистами, которые приходят в наши лаборатории и выпытывают сенсации.
В 2020 году, в ковидные времена, мы разрабатывали тест-полоски на антитела к SARS-CoV-2. Тема была новая, конечно, все шло не так быстро. Но руководство университета нагнало журналистов, и отказаться было нельзя. Чтобы избежать ошибок, пришлось все показать и рассказать понятным языком. Но я оказался слишком оптимистичен в оценке уровня понимания журналистов. Когда вышел сюжет, оказалось, что все, что я объяснил, поняли совершенно не так.
«Ученые отрезали белок шипа и поместили в клетки человека» - ну как так-то, ведь несложно! Экспрессировали RBD-домен, иммобилизировали на золотых наночастицах. Как тут можно извратить фразу!
В общем, глаз да глаз нужен за ними! Наверное, проще текст им самим написать, хотя не уверен, что это поможет. Мой личный лайфхак: когда я работал в большой науке, при приходе журналистов я надевал черный халат и на любые вопросы отвечал, что я обычный техник. И это срабатывало - они сразу теряли интерес и шли искать новую жертву
😁69🔥10❤9💯7👍4
Ты присылаешь емейлы и зовешь на курс по хроматографии белков. Но ты зовешь без уважения.
Или растет и ширится урон от чата джипити! Нет белковой хроматографии (и белкового электрофорезе, кроме, разве что, электрофореза на холодце). Есть - хроматография белков.
Или растет и ширится урон от чата джипити! Нет белковой хроматографии (и белкового электрофорезе, кроме, разве что, электрофореза на холодце). Есть - хроматография белков.
😁50❤6💯3
Губки для мытья посуды и для вестерн-блоттинга
Когда Alister Towbin в конце 1970х собрал самый первый прибор для переноса белков на мембрану, он использовал электроды от дестейнера для гелей, а гель и мембрану закрепил между простыми американскими абразивными губками Scotch Brite 96 и пластиковыми штативами для микропипеток, зажав все канцелярскими резинками.
Прошло уже 45 лет, почти никто самопальные девайсы для блоттинга не использует. А вот абразивные губки Scotch Brite 96 фирма 3M все еще производит и продает!
Энжойте и знайте: губки полезны не только для мытья посуды, но и для вестерн-блоттинга!
Когда Alister Towbin в конце 1970х собрал самый первый прибор для переноса белков на мембрану, он использовал электроды от дестейнера для гелей, а гель и мембрану закрепил между простыми американскими абразивными губками Scotch Brite 96 и пластиковыми штативами для микропипеток, зажав все канцелярскими резинками.
Прошло уже 45 лет, почти никто самопальные девайсы для блоттинга не использует. А вот абразивные губки Scotch Brite 96 фирма 3M все еще производит и продает!
Энжойте и знайте: губки полезны не только для мытья посуды, но и для вестерн-блоттинга!
🔥54❤1
Моча для будущего врача
Если вдруг вам понадобится искусственная моча, вы можете найти рецепт ее приготовления в этой статье.
Здесь представлены не только варианты нормальной мочи, но и образцы с имитацией различных нарушений обмена веществ (протеинурия, кетонурия, присутствие гемоглобина, лейкоцитов и других компонентов).
Казалось бы - прикол: зачем это нужно, если можно набрать свеженькой?! Но фишка в том, что для учебных целей такой материал гораздо удобнее. Состав стандартизован, ничего дополнительно проверять не нужно. А главное - безопасно, никаких инфекций!
Если вдруг вам понадобится искусственная моча, вы можете найти рецепт ее приготовления в этой статье.
Здесь представлены не только варианты нормальной мочи, но и образцы с имитацией различных нарушений обмена веществ (протеинурия, кетонурия, присутствие гемоглобина, лейкоцитов и других компонентов).
Казалось бы - прикол: зачем это нужно, если можно набрать свеженькой?! Но фишка в том, что для учебных целей такой материал гораздо удобнее. Состав стандартизован, ничего дополнительно проверять не нужно. А главное - безопасно, никаких инфекций!
👍47🔥16❤4
Настольные книги: конъюгация биомолекул.
В наших белковых, да и не только белковых делах, приходится сшивать разные молекулы, например для получения аффинных сорбентов, конъюгатов антител с ферментными и флуорсецентными метками, соединения гаптенов с носителями для иммунизации, мечения белков и нуклеиновых кислот флуоресцентными метками и для выполнения множества других задач.
Невероятно полезная книга для того, чтобы узнать больше о конъюгации и проапдейтить свои скилы - книга Greg T. Hermanson Bioconjugate Techniques (есть 3 издания этой книги). Это одно из самых полных и практических руководств по химическим методам связывания биомолекул. Она охватывает все: от основ реакционной способности функциональных групп до продвинутых стратегий получения сложных биоконъюгатов.
Автор тщательно объясняет, как происходит химическая модификация белков, олигонуклеотидов, сахаров, липидов и наночастиц, как обеспечить направленность, избежать побочных реакций и добиться стабильности полученных продуктов. Здесь не только теория, вся информация привязана к лабораторной практике: даны пошаговые протоколы, рекомендации по выбору реагентов, схемы очистки и стабилизации, а также реальные примеры из биотехнологий, диагностики и фармацевтики.
Энжойте и получайте конъюгаты легко и правильно!
В наших белковых, да и не только белковых делах, приходится сшивать разные молекулы, например для получения аффинных сорбентов, конъюгатов антител с ферментными и флуорсецентными метками, соединения гаптенов с носителями для иммунизации, мечения белков и нуклеиновых кислот флуоресцентными метками и для выполнения множества других задач.
Невероятно полезная книга для того, чтобы узнать больше о конъюгации и проапдейтить свои скилы - книга Greg T. Hermanson Bioconjugate Techniques (есть 3 издания этой книги). Это одно из самых полных и практических руководств по химическим методам связывания биомолекул. Она охватывает все: от основ реакционной способности функциональных групп до продвинутых стратегий получения сложных биоконъюгатов.
Автор тщательно объясняет, как происходит химическая модификация белков, олигонуклеотидов, сахаров, липидов и наночастиц, как обеспечить направленность, избежать побочных реакций и добиться стабильности полученных продуктов. Здесь не только теория, вся информация привязана к лабораторной практике: даны пошаговые протоколы, рекомендации по выбору реагентов, схемы очистки и стабилизации, а также реальные примеры из биотехнологий, диагностики и фармацевтики.
Энжойте и получайте конъюгаты легко и правильно!
❤49👍10🔥8
Смотреть как идет ультрацентрифугирование
В древние времена при ультрацентрифугировании применяли специальные насадки для отслеживания процесса осаждения веществ. Процесс визуализации был основан на рефрактометрическом методе - шлирен-эффекте и позволял не только наблюдать, как вещество осаждается, но и определять коэффициент седиментации и молекулярную массу.
Шлирен-эффект - это оптическое явление, при котором становятся видимыми области в прозрачной среде с неоднородностями показателя преломления. Его применяют для изучения потоков воздуха в аэродинамике и для проверки утечек газа.
Применение шлирен-эффекта в ультрацентрифугах основано на использовании оптической системы, которая регистрирует изменения показателя преломления раствора, вызванные градиентами концентрации во время осаждения. Этот метод позволяет визуализировать границы осаждающихся частиц или молекул в образце, предоставляя информацию об их размере и молекулярной массе. В традиционной системе Шлирена используются источник света, щель, линзы и камера для захвата получающихся рисунков шлирена, которые по сути являются профилями градиента показателя преломления.
Однако метод требует длинного оптического пути, точной юстировки и сложного оборудования. При регистрации сигнала возможно наложение шлирен-паттернов, что усложняет анализ. Метод обладает сравнительно невысокой чувствительностью и применим при концентрации белков от 1 до 50 мг/мл.
Поэтому современные приборы чаще используют УФ-абсорбцию, интерференцию или флуоресценцию. Кстати, есть хорошая книга по аналитическому ультрацентрифугированию: Introduction to Analytical Ultracentrifugation
Фото бекмановской центрифуги - из коллекции Science History Institute, там много интересных материалов!
В древние времена при ультрацентрифугировании применяли специальные насадки для отслеживания процесса осаждения веществ. Процесс визуализации был основан на рефрактометрическом методе - шлирен-эффекте и позволял не только наблюдать, как вещество осаждается, но и определять коэффициент седиментации и молекулярную массу.
Шлирен-эффект - это оптическое явление, при котором становятся видимыми области в прозрачной среде с неоднородностями показателя преломления. Его применяют для изучения потоков воздуха в аэродинамике и для проверки утечек газа.
Применение шлирен-эффекта в ультрацентрифугах основано на использовании оптической системы, которая регистрирует изменения показателя преломления раствора, вызванные градиентами концентрации во время осаждения. Этот метод позволяет визуализировать границы осаждающихся частиц или молекул в образце, предоставляя информацию об их размере и молекулярной массе. В традиционной системе Шлирена используются источник света, щель, линзы и камера для захвата получающихся рисунков шлирена, которые по сути являются профилями градиента показателя преломления.
Однако метод требует длинного оптического пути, точной юстировки и сложного оборудования. При регистрации сигнала возможно наложение шлирен-паттернов, что усложняет анализ. Метод обладает сравнительно невысокой чувствительностью и применим при концентрации белков от 1 до 50 мг/мл.
Поэтому современные приборы чаще используют УФ-абсорбцию, интерференцию или флуоресценцию. Кстати, есть хорошая книга по аналитическому ультрацентрифугированию: Introduction to Analytical Ultracentrifugation
Фото бекмановской центрифуги - из коллекции Science History Institute, там много интересных материалов!
🔥37❤6👍5
Iron balls иммуноанализа
Как думаете, можно ли приспособить расходку для пневматических пистолетов к иммуноанализу?
А вот в славные 1970-е придумали использовать металлические пульки для «воздушек» в качестве магнитного иммуносорбента для ИФА и радиоиммунологического анализа (RIA). Предтеча шариков для иммунопреципитации Dynabeads, можно сказать - только покрупнее и «пожелезнее».
К тому времени американская промышленность уже давно выпускала металлические шарики для пневматики одинакового размера и с высокой точностью. А одинаковость площади твердой фазы при иммобилизации компонентов иммунохимических тест-систем - важный фактор воспроизводимости.
Для сорбции антигена поверхность шарика покрывали полистиролом (то есть вместо стенок планшета антигены на шариках), а промывки можно было упростить с помощью магнитного штатива. Протокол прикрепляю в комментариях.
Энжойте! Теперь вы знаете, что даже в спортивном магазине можно найти полезное для ИФА.
Как думаете, можно ли приспособить расходку для пневматических пистолетов к иммуноанализу?
А вот в славные 1970-е придумали использовать металлические пульки для «воздушек» в качестве магнитного иммуносорбента для ИФА и радиоиммунологического анализа (RIA). Предтеча шариков для иммунопреципитации Dynabeads, можно сказать - только покрупнее и «пожелезнее».
К тому времени американская промышленность уже давно выпускала металлические шарики для пневматики одинакового размера и с высокой точностью. А одинаковость площади твердой фазы при иммобилизации компонентов иммунохимических тест-систем - важный фактор воспроизводимости.
Для сорбции антигена поверхность шарика покрывали полистиролом (то есть вместо стенок планшета антигены на шариках), а промывки можно было упростить с помощью магнитного штатива. Протокол прикрепляю в комментариях.
Энжойте! Теперь вы знаете, что даже в спортивном магазине можно найти полезное для ИФА.
❤30🔥19👍6
МАX среди нас!
Вы же уже слышали, что с 1 сентября цифровая платформа MAX войдет в список программ, обязательных для предварительной установки на научное оборудование в 2025 году?
В случае технической неготовности оборудования к установке (форезные камеры, магнитные мешалки, дозаторы) производитель обязан приклеить фотографию со значком мессенджера.
Это шутка конечно, не после 1, а после 3 сентября!
Вы же уже слышали, что с 1 сентября цифровая платформа MAX войдет в список программ, обязательных для предварительной установки на научное оборудование в 2025 году?
В случае технической неготовности оборудования к установке (форезные камеры, магнитные мешалки, дозаторы) производитель обязан приклеить фотографию со значком мессенджера.
😁60😱12❤2
Forwarded from Эрик
Результаты пцрок и проточной цитометрии будут автоматом подгружаться на госуслуги. Не сообщайте никому код из смсок, это разводы от хищнических журналов.
😁61
Forwarded from Wild Turkey
Результаты секверирования будут автоматически проверяться на фрагменты иноагентов
😁48😱5❤3